Eficácia anti-inflamatória do Meloxicam Comprimido em cães com Sinovite Reversível induzida experimentalmente

Empresa

UCBVET Saúde Animal

Data de Publicação

04/11/2016

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Produtos Relacionados

Meloxytrat

Gisele Maria de Andrade^*
([email protected])
M.V., Dra. em Medicina Veterinária pela UNESP/Jaboticabal
Depto. de PD&I Técnico, UCBVet Saúde Animal

Moacir Marchiori Filho
([email protected])
M.V., Dr. em Medicina Veterinária Preventiva pela FMVZ/USP.
Diretor de Tecnologia e Qualidade, UCBVet Saúde Animal.

Gláucio Pereira Machado
([email protected])
M.V., Laboratórios Ecolyzer Ltda.

Diego Salgado de Almeida
([email protected])
M.V., Laboratórios Ecolyzer Ltda.

Armando Leonelo Neto([email protected])
Farmacêutico, Depto.de PD&I Farmacotécnico, UCBVet Saúde Animal

Raquel Amador Ré
([email protected])
Química e Farmacêutica, Depto. de PD&I Analítico, UCBVet Saúde Animal

Diana Iara Gava
([email protected])
Química Depto.de PD&I Analítico, UCBVet Saúde Animal

Thaís Marino Silva Girio
([email protected])
M.V., Dra. em Medicina Veterinária Preventiva pela UNESP/Jaboticabal. Depto. Regulatório, UCBVet Saúde Animal

Marcelo Brunini
([email protected])
M.D., FCM/Unicamp, Presidente UCBVet Saúde Animal

^*Autora para correspondências

RESUMO: A eficácia anti-inflamatória do meloxicam comprimido^* foi investigada através da indução experimental da sinovite reversível pela injeção de cristais de urato de sódio na articulação fêmoro-tibiopatelar em 16 Beagles. O produto meloxicam foi administrado via oral na forma de comprimido (0,2 mg/ kg de peso corpóreo) em 8 animais, 15 minutos após a indução da sinovite. Exames clínicos, laboratoriais, ortopédicos e colheita de líquido sinovial foram realizados durante o período do estudo. A eficácia clínica foi avaliada pelo uso de sistema de escores de claudicação. A diminuição da claudicação foi observada a partir de 4 horas pós-indução e 24 horas após todos retornaram a condição normal. As avaliações demonstraram diferenças significativas (p<0,05) nos sinais clínicos dos animais do grupo teste em comparação ao grupo controle demonstrando a eficácia do meloxicam na dose preconizada.
Unitermos: AINE, articulação, COX-2, inflamação, musculoesquelético

Introdução

As drogas anti-inflamatórias não esteroides (AINES) são agentes com efeitos anti-inflamatórios, analgésicos e antipiréticos⁵. São capazes de bloquear desde as manifestações iniciais do processo inflamatório, como dor, calor e rubor, até as manifestações mais tardias como reparação e proliferação tecidual. Os AINES atuam inibindo a ação das enzimas ciclogenases (COX) e lipogenases que degradam o ácido araquidônico, evitando a liberação de mediadores químicos e consequentemente reduzindo o processo imunossupressor⁸. A ciclogenase é uma enzima que catalisa a conversão do ácido araquidônico em prostaglandina H2, o precursor da uma variedade de mediadores biológicos ativos tais como a prostaglandina E2 (PGE2), prostaciclina e tromboxano A2^10,18. Duas isoformas da COX são COX-1 e COX-2. A COX-1, é responsável por processos fisiológicos, principalmente ligados ao estômago e é produzida constitutivamente em vários tecidos, amplamente distribuída, e acredita-se, estar envolvida na homeostase tecidual e manutenção dos níveis das prostaglandinas. A COX-2 é uma enzima induzida pelas citocinas pró-inflamatórias, promotores de tumor, fatores de crescimento e oncogênicos, e está envolvida principalmente na regulação das respostas inflamatórias em vários tipos de células tais como os monócitos, fibroblastos e células endoteliais^1,13. Além disso, a enzima COX-2 está associada com as respostas inflamatórias, com envolvimento na produção das prostaglandinas (PGs) especialmente a PGE2, considerada o mediador chave da dor, vasodilatação e edema^4,16.

O meloxicam é um anti-inflamatório não esteroide (AINE) indicado para o tratamento da inflamação e da dor associados com as doenças musculoesqueléticas agudas e crônicas e amplamente reconhecido como sendo o primeiro anti-inflamatório comercialmente disponível seletivo para a COX-2^6,17,9, e 12 vezes mais eficiente na inibição da atividade da COX-2 do que na inibição da COX-1¹². O modelo experimental de sinovite induzida produz sinais transitórios inflamatórios consistentes com a artrite, e os efeitos do tratamento podem ser mensurados basicamente em um período de até 1 dia após a indução da claudicação¹⁹.

O objetivo do presente estudo foi avaliar a eficácia anti-inflamatória do produto a base de meloxicam em cães submetidos à sinovite reversível induzida experimentalmente com sais de urato de sódio.

Materiais e Métodos

O protocolo experimental do presente estudo foi aprovado pela Comissão de Ética no Uso de Animais da Empresa Ecolyzer. (CEUA No. 00044/12)

Animais

Dezesseis cães da raça Beagle provenientes do canil Experimental da Ecolyzer, machos e fêmeas, com idade entre 12 e 18 meses de idade, peso médio de 12,71 kg e identificados por microchips, foram utilizados neste estudo. Os cães foram mantidos em canil de alvenaria, em baias coletivas (8 animais/baia), alimentados duas vezes ao dia com ração comercial, e acesso livre a água. Os cães não haviam recebido nenhuma medicação prévia durante 30 dias anteriores ao início do experimento, sem histórico de problemas articulares e considerados clinicamente normais após a realização de exame físico completo nos dias D-14, D-7 e D-1 do estudo. Amostras de sangue para análise hematológica, bioquímica e de urina foram realizadas no dia D-7 para a seleção dos animais.

Indução da Sinovite

No dia D0 do estudo, a sinovite reversível foi induzida na articulação fêmoro-tibio-patelar direita de todos os animais do estudo¹⁶. Antes do procedimento cirúrgico, os cães foram anestesiados com propofol (6,5 mg/kg) por via endovenosa, pelo período de 5 a 10 minutos e a região articular foi preparada através de tricotomia e antissepsia local. O líquido sinovial foi colhido utilizando-se agulhas e seringas plásticas estéreis descartáveis, seguida da indução da sinovite através da injeção de 1 mL de suspensão de cristais de urato de sódio (U2875 Sigma) na concentração de 17 mg/mL de solução salina estéril.

Tratamento

Quinze minutos após a indução da sinovite no dia D0, o produto Meloxytrat comprimido® foi administrado aos animais do grupo teste, por via oral, na dose única de 0,2 mg/kg de peso corpóreo. Os animais do grupo controle não foram tratados.

Colheitas de Amostras para Análise

Amostras de sangue (5 mL) de cada animal foram colhidas nos tempos D0, D+12 horas e D+24 horas após a indução da sinovite para a determinação de proteína total (PT) sérica e fibrinogênio (Fb) plasmático e para a determinação dos parâmetros laboratoriais (hematológicos e bioquímica sérica). A colheita do líquido sinovial da articulação fêmoro-tibio-patelar foi realizada antes da indução e 24 horas após a indução da sinovite. O líquido sinovial foi avaliado de acordo com o perfil citológico e dosagem de PGE2, após prévia preparação do local e manutenção do animal sob anestesia com propofol (6,5 mg/kg) via I.V.

Exames Clínicos e Escores

Os exames clínicos consistiram na avaliação da frequência cardíaca, frequência respiratória e temperatura retal, todos realizados nos dias D-7 e D-1.

Os parâmetros hematológicos e bioquímicos séricos analisados consistiram de: hemograma completo, dosagem das enzimas alanina aminotransferase (ALT), Aspartato aminotransferase (AST), gama glutamiltransferase (GGT), fosfatase alcalina, bilirrubina direta, indireta e total, dosagem de proteína total e fibrinogênio, dosagem de ureia e creatinina e urinálise.

Exames do líquido sinovial considerou exame citológico como a contagem total de leucócitos e a dosagem de prostaglandina E2 (PGE2).

Os exames ortopédicos foram realizados no dia D0, imediatamente antes da indução da sinovite, e nos tempos 01h30 min, 02h00 min, 02h30 min, 03h30 min, 04h00 min, 04h30 min, 06h00 min, 08h00 min, 12h00 min e 24h00 min pós-indução, considerando-se a avaliação do escore de claudicação que se baseia em 5 parâmetros: comportamento geral, claudicação em estação, claudicação ao trote, resposta à elevação do membro contralateral e resposta à flexão e extensão do membro. Para cada parâmetro foi atribuído o grau de severidade dentro de uma escala de 0 a 3, sendo o escore de claudicação (escore total) correspondente à somatória dos graus observados para cada parâmetro. Durante as avaliações, os graus de intensidade dos parâmetros foram classificados de acordo com o sistema proposto por BONNEAU³:

Análise Estatística

Para a análise dos dados foi utilizado o software SPSS Statistics 17.0, e o nível de significância estabelecido p<0,05. Considerando a aplicação do teste T para a avaliação dos parâmetros clínicos, hematológicos, proteína total, fibrinogênio e líquido sinovial. Para os parâmetros urinálise, e exame ortopédico foi empregado o teste não paramétrico Mann-Whitney U.

Resultados e Discussão

Neste estudo, a sinovite aguda foi induzida através da injeção intrasinovial de cristais de urato, reproduzindo os sinais clínicos e características consistentes com a condição de claudicação, onde o pico de intensidade desta condição foi atingido cerca de 2 horas após a indução, para então vir a diminuir entre 4 horas e meia a 8 horas. A recuperação dos cães retornando a condição normal de locomoção ocorreu dentro de 24 horas pós-indução da sinovite. Resultados semelhantes foram observados em cães tratados com anti-inflamatórios não esteroides após terem sido submetidos experimentalmente a sinovite induzida^3,20.

Os resultados dos exames clínicos se mantiveram normais, dentro dos valores esperados para a espécie canina, quando se comparou as médias dos parâmetros vitais, não havendo diferença estatística entre os grupos controle e grupo teste nos momentos D-7 e D-1.

Não houve diferença significativa (p>0,05) para a maioria dos parâmetros hematológicos e urinários analisados. Por outro lado, os resultados dos parâmetros de leucócitos (WBC), neutrófilos segmentados, linfócitos, monócitos e GGT mostraram diferença significativa (p<0,05) entre os grupos, embora, a diferença encontrada estava dentro dos valores esperados para a espécie canina.

Na avaliação dos resultados ortopédicos obtidos após a aplicação do teste não paramétrico de Mann-Whitney U, para amostras independentes e comparando-se as medianas dos escores totais apresentados pelos grupos experimentais, imediatamente antes da indução e nos tempos 01h30min, 02h00 min, 02h30min, 03h30min, 04h00min, 04h30min, 06h00min, 08h00min, 12h00min e 24h00min, foi observada diferença estatística significativa (p<0,05) entre os grupos na avaliação do escore total nos tempos 04h00min, 04h30min, 06h00min, 08h00min e 12h00min, sendo os valores encontrados para o grupo teste menores em comparação ao grupo controle (Tabela 1).

Tabela 1: Comparação das médias do escore total, de acordo com Bonneau et al. (2005), entre os grupos experimentais

Com relação ao parâmetro comportamento geral, 25% dos cães do grupo teste apresentaram grau 0 (normal e disposto a brincar) no tempo 04h30min, 62,5% no tempo 06h00 min e 100% a partir do tempo 12h00min, já em relação ao grupo controle o grau zero de comportamento foi observado em 62,5% dos animais a partir do tempo 12h00min.

Para o parâmetro claudicação em estação, 62,5% dos animais do grupo teste não apresentaram alterações no tempo 04h30min, já no tempo 06h00min, 87,5% desses animais não apresentavam alterações, e por fim, a partir do tempo 08h00min, 100% dos animais não apresentavam alterações de claudicação. Por outro lado, no grupo controle verificou-se a ocorrência de claudicação em estação de grau 0 (normal apoia totalmente o membro) a partir do tempo 8h00min, em 25% dos animais (Figura 1)

Figura 1: Graus médios apresentados pelos grupos teste e controle para o parâmetro de claudicação em estação durante o estudo

Comparando-se o parâmetro claudicação em trote, observou-se grau 0 (normal, apoia totalmente o membro) em 25%, 75%, 100% respectivamente dos animais tratados, observados nos tempos 04h30min, 06h00min, 08h00min e12h00 min, respectivamente. Ao passo que no grupo controle, o grau 0 (zero) foi registrado somente a partir do tempo 12h00min (Figura 2).

Na resposta à elevação do membro contralateral, pode-se observar grau 0 (ausência de dor, aceita o deslocamento do peso), em 0%, 12,5%, 75%, 100% e 100% respectivamente nos cães tratados, observados nos tempos 04h00min, 04h30min, 06h00min, 8h00min e 12h00min, respectivamente. No grupo controle, o grau 0 (zero) foi observado em apenas 25,5 % dos animais no tempo 12h00min, e 100% dos animais atingiram grau 0, 24h00min pósindução (Figura 3).

Figura 2: Graus médios apresentados pelos grupos teste e controle para o parâmetro de claudicação ao trote durante o estudo

Figura 3: Graus médios apresentados pelos grupos teste e controle para o parâmetro de resposta à elevação do membro contra lateral durante o estudo

O grau 0 (normal, ausência de resposta) para o parâmetro flexão e extensão do membro foi observado em 50%, 75% e 100% dos cães tratados, respectivamente, observados nos tempos correspondentes 04h30min, 06h00min e 08h00min. O grau 0, foi observado em 12,5% dos animais controle a partir de 08h00min (Figura 4).

Figura 4: Graus médios apresentados pelos grupos teste e controle para o parâmetro de resposta à flexão e extensão do membro durante o estudo

Tabela 2: Comparação das médias de concentração de proteína totais e fibrinogênio no líquido sinovial entre os grupos experimentais

Tabela 3: Comparação dos resultados das contagens totais de leucócitos e dosagem de prostaglandina no líquido sinovial entre os grupos experimentais

Um dos elementos chave de um modelo de inflamação é uma resposta de hiperalgesia sustentada que possa ser revertida pela administração de um AINES⁷. Este requisito necessário foi cumprido no presente estudo, sendo a condição de hiperalgesia completamente revertida cerca de uma hora após a administração do produto Meloxytrat®.

Houve diferença estatística significativa (p<0,05) para as concentrações de proteína sérica e fibrinogênio plasmáticos entre os grupos teste e controle imediatamente antes da indução da sinovite, e nos tempos 12h00min e 24h00 min pós-indução da sinovite, sendo que os valores encontrados para os animais do grupo teste encontravam-se dentro do intervalo de normalidade¹¹, enquanto que no grupo controle, os valores estiveram dentro da normalidade antes da indução e 12h00 pós-indução, e acima do intervalo de normalidade no tempo 24h00 min (Tabela 2).

Nos resultados da análise do líquido sinovial, comparandose as médias da contagem total de leucócitos e da dosagem de prostaglandina (PGE2) foram encontradas diferenças significativas (p<0,05) entre os grupos para ambos os parâmetros avaliados no tempo 24h00min do estudo (Tabela 3). Vários estudos têm mostrado que a expressão da COX-2 aumenta os níveis da PGE2, e esta por sua vez induz várias reações inflamatórias^21,10,2. A diferença entre o grupo teste tratado com Meloxytrat® e grupo controle no tempo avaliado de 24 horas explica o efeito anti-inflamatório do Meloxytrat®.

Conclusão

Os resultados obtidos neste estudo demostraram a eficácia anti-inflamatória do produto Meloxytrat®, à base de meloxicam, para cães na forma de comprimido. Os dados também mostraram que o produto reduziu a produção das prostaglandinas responsáveis pelos sinais e sintomas iniciais do processo inflamatório e da sensação de algesia, assim como a redução da quantidade de células inflamatórias no local lesionado, promovendo uma recuperação mais rápida dos animais tratados do quadro de dor aguda causada pela sinovite induzida em comparação com o grupo controle.